不溶性微粒应用专题 | 有色样品的不溶性微粒测试

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摘要：为探究有色样品的颜色对光阻法检测不溶性微粒是否存在影响，本实验以深红色血液制品为对象，加入标粒之后检测，观察标粒粒径是否偏移；本实验采用了美国Accusizer A2000 USP不溶性微粒检测仪进行测试，实验结果有力表明，该设备在检测红色样品时抗干扰能力强，可以提供可靠的不溶性微粒检测数据。

关键词：不溶性微粒；光阻法；有色样品；血液样品；检测干扰

不溶性微粒（Sub-visible Particle），为不溶于水和有机溶剂、非代谢的、肉眼所看不见的颗粒物，通常指粒径＜50μm的微粒。注射剂中的不溶性微粒主要来源为生产过程中各类包装容器黏附的各种微粒、生产原料以及生产工艺操作中产生的不溶性微粒，进入人体可能引起各种不良反应。

光阻法（LO/LE，Light obscuration/Light Extinction），又称光遮蔽法、光消减法，其基本原理是使样品液流经一个狭窄的流通池，激光束穿过流通池并被光电探测器接收，当溶液中的颗粒通过光束时，会遮挡部分光线，引起光强变化，该变化与颗粒的投影面积成正比，通过信号处理可换算为颗粒的粒径与数量。

由于光阻法检测速度快、定量精准度高、重复性佳，且能同时测定微粒大小和数量，适用于大范围粒径区间微粒分析，在现行的中国药典通则 <0903> 不溶性微粒检查法和美国药典 < 788 > 中，均将光阻法列为第一方法学，光阻法是制药行业及相关领域不溶性微粒控制的首选标准检测方法。

不过，基于光阻法的光学方法学特性，且目前市场上主流光阻法仪器多采用波长约 630-650nm 的红色激光作为光源，一个值得探讨的问题是：其检测结果是否会受到样品本身物理特性的干扰，尤其是样品的颜色，会不会成为关键影响因素？对于红色样品（如含铁制剂）而言，会不会因自身颜色干扰检测过程，使得测试结果变得不可靠？

因此，面对这类有色样品时，光阻法设备是否能够准确测试出颗粒的粒径和浓度结果，就成为了需要重点考量的问题。

为考察颜色对光阻法检测的影响，我们以某血液制品为样本，该样品呈红色，使用AccuSizer A2000 USP不溶性微粒检测仪进行不溶性微粒测试。

图1 样品原液、5倍稀释、10倍稀释

如图1所示，样品原液、5倍稀释样品、10倍稀释样品均呈现为不透明的深红色，其中样品原液接近黑色，随着稀释倍数的递增其颜色深度呈梯度减淡，但仍然保持深红色的基本颜色特征。

在实验设计中，使用添加标粒的方式进行对照测试以评估原液颜色对于测试结果的影响。

将24μm标准粒子加入纯化水中，测试其平均粒径，作为对照组，将24μm标准粒子加入不同梯度稀释倍数的样品中，测试其平均粒径，探究颜色对标粒粒径结果是否有影响。

图2 水+24μm标粒测试结果谱图

图3 样品原液+24μm标粒测试结果谱图

图4 五倍稀释样品+24μm标粒测试结果谱图

图5 十倍稀释样品+24μm标粒测试结果谱图

将24μm标粒添加到纯化水中，平均粒径为23.971μm，然后将24μm标粒添加到样品原液中制得样1，进行检测，平均粒径为23.734μm，浓度2225颗/mL，将样1稀释5倍，测试的平均粒径为23.734μm，浓度537颗/mL；再将样1稀释10倍，平均粒径为23.951μm，浓度254颗/mL。

实验数据显示，相比加入纯水中的标粒结果，原液添加标粒的检测结果存在轻微粒径偏移，但随着稀释倍数的增加，该偏移现象减弱，说明样品基质对检测的干扰有限。尽管原液为深红色，其光学特性未对粒径识别与计数造成显著影响，证明该样品直接进行该颜色状态下的不溶性微粒检测，颜色因素未导致明显系统误差。

此外，报告中还进行了仪器状态验证，使用美国MML公司提供的0.8、2、5μm混合标准颗粒进行校准，确保检测系统在粒径识别与计数方面的准确性。在设定检测下限为5μm的前提下，不同阈值下的测试结果重复性良好，进一步支持了该方法在有色样品中的适用性。

综上，通过实际测试案例可知，尽管光阻法在理论上可能受到样品颜色的干扰，但AccuSizer A2000 USP不溶性微粒检测仪在检测红色血液制品时，仍能保持高准确性与重复性。该仪器具备抗颜色干扰能力，能够为有色样品如含铁制剂、血液衍生物等提供可靠的不溶性微粒数据。

图6  AccuSizer A2000 USP不溶性微粒检测仪

AccuSizer A2000 USP不溶性微粒检测仪是Entegris（PSS）旗下的专业检测设备，采用单颗粒光学传感计数（SPOS）技术，融合光阻效应与光散理论，实现精准检测。设备检测范围覆盖 0.5-400μm，有1024数据通道与32自定义通道，兼具 0.01μm 超高分辨率和10PPT级超高灵敏度，最小进样量低至50μL，微量进样仍保持高准确性。

设备采用模块化设计，支持自动进样、自动稀释等功能拓展，软件符合 FDA 21 CFR Part11 及cGMP规范，符合ChP、USP、JP 等多国药典标准与法规报告，可满足研发、质控全流程需求。